我们开发出并使用了一种非常高效的单克隆抗体纯化方案，在两步法层析工艺中将起始样品的聚体水平从12%降至0.6%，而单体产量达到81%。此工艺包括采用MabSelect SuRe进行捕获步骤，以及采用Capto adhere进行精细纯化步骤。此外，我们还介绍了从基于HiScreen预装柱（5 mL）的小规模工艺放大到在ÄKTApilot™系统上使用AxiChrom柱（500至600 mL）的大规模工艺的线性放大。放大方案是利用实验设计（Design of Experiments，DoE)方法与Monte Carlo法模拟分析的结合来开发的。DoE研究的结果作为模拟研究的输入值，以便验证放大工艺的可靠性。宿主细胞蛋白（HCP）的量从37000降低至1.3 ppm，配体残留也从1.8 ppm降低至可忽略不计。通过确定高产量的稳定参数，过滤步骤也得到了优化。
简介
将小规模研究的优化结果线性放大至中试和大规模工艺的能力是任何成功的工艺开发项目的关键。内在的挑战在于存在的风险，即优化的参数和结果——如提高的产量和纯度——可能无法以可预测的方式从小规模线性放大至中试或大规模生产的风险。为了克服这些障碍，并确保工艺开发流程有一个更加容易预测且稳定的结果，我们为生物制药的生产开发了一个工艺开发流程，着重于维持优化参数（如产量和纯度）从小规模到中试研究的完整性。
这是一套四个应用文献中的第三个，这一套应用文献旨在为您提供高效的工具和方法以增强有效单克隆抗体的鉴定和生产——从实验室和临床试验的探索阶段到大规模生产。其它的应用文献是：
• 单克隆抗体纯化工艺中蛋白A捕获步骤的高通量筛选和优化（28-9468-58）
• 单克隆抗体纯化工艺中复合配基介质精细纯化步骤的高通量筛选和优化（28-9509-60）
• 一种灵活的基于ReadyToProcess™产品的抗体纯化工艺（28-9403-48）
这里所说的单克隆抗体纯化工艺中的主要挑战是指起始样品中蛋白聚集的发生率高（12%）。在维持基于MabSelect SuRe和Capto adhere介质的两步法层析工艺对纯度和产量的预设标准的同时，这种抗体工艺成功放大了超过10倍。利用包含DoE和计算机的蒙特卡罗法模拟分析的流程对这种从小规模研究中计算出的最佳工艺条件进行进一步的改善和稳定性验证。利用HiScreen柱在小规模阶段开展的DoE研究产生了捕获和精细纯化步骤的最佳点（sweet spot）分析，其中有关产量和纯度的预设条件得以满足。来自DoE研究的结果随后作为蒙特卡罗法模拟分析的输入值，以检测两步法层析所获得的最佳条件的稳定性。此流程（图1）允许在放大之前对层析条件和工艺稳定性进行快速筛选。
.jpg)